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发布时间：2022-04-20 07:53
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热心网友
时间：2023-06-28 16:01
DNA中会影响PCR过程的杂质有：
若提取DNA时某些杂质如DNAase、RNAase、RNA等会对PCR产生影响。
另外Taq酶、镁离子、DNTP也会产生影响。
酚、氯仿、SDS、蛋白酶、蛋白等。
标准的PCR过程分为三步：
DNA变性
（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
退火
（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
延伸
（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。如图所示：现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。
检测
PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。
热心网友
时间：2023-06-28 16:01