小爱科普:IP&Co-IP实验知多少~

发布网友 发布时间：2024-10-23 22:29

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热心网友 时间：2024-10-27 09:26

IP&Co-IP实验原理基于抗体特异性反应纯化特定蛋白。在IP实验中，抗体与细胞裂解液中的目标蛋白结合后，通过ProteinA/G抗体复合物沉淀下来，最后通过SDS-PAGE或Western Blot分析沉淀的蛋白。

Co-IP操作流程包括实验组、对照组的设置，关键在于抗体的选择、使用比例以及琼脂糖珠或磁珠的选择。实验组需包括磁珠、对应抗体、目标蛋白和目的蛋白。对照组则包括阴性对照（不含目的蛋白的抗体）和阳性对照（直接使用抗体进行WB检测）。对照组设置有助于排除非特异性结合，确保实验结果的准确性。

在选择抗体时，需考虑其是否适用于Co-IP实验，单抗相比多抗具有更高的特异性。同时，确保用于IP和WB的抗体为不同种属，以避免干扰。推荐使用CST抗体，其说明书标注了最佳使用比例，可有效避免高背景和无信号的问题。

琼脂糖珠成本较低，而磁珠则更为方便且背景更低，但使用时需配合磁力架。Co-IP实验结果的验证方式根据目标蛋白的已知或未知状态而定，已知蛋白通过Co-IP/WB验证，未知蛋白则采用Co-IP/MS。

实验过程中，常见问题包括高背景和无信号，合理设置对照组、选择合适的抗体比例以及正确使用琼脂糖珠或磁珠可以有效解决这些问题。推荐使用absin的IP/CoIP试剂盒，其操作简单且效果稳定。

标签抗体在Co-IP实验中的应用日益广泛，CST提供了多种标签抗体供选择，解决了一些因标签分子量过大导致的实验问题。新研发的小片段标签抗体，降低了分子量对实验结果的影响，提高了实验成功率。后续将继续详细探讨这一创新产品，敬请关注。